到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應建立鼠肺適應株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機制不僅與巨噬細胞有關，在研究抗補體機制中還應考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補體機制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細支氣管上皮上。在終端呼吸性細支氣管上皮細胞也表達α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細支氣管細胞上，部分肺泡壁細胞表達這種受體，這種細胞為肺泡Ⅱ型細胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細胞既表達α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細胞中復制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標準的動物模型制備相關完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1.小鼠模型感染后臨床癥狀變化

小鼠感染H7N9病毒后的存活情況如圖1A所示，其中接種106 TCID50病毒的小鼠14天內(nèi)全部存活，而107或108 TCID50病毒對小鼠的致死率分別達20%和60%。小鼠感染106 TCID50病毒后，第2天開始出現(xiàn)體重下降的現(xiàn)象，第9天體重降至最低，僅為攻毒前的71.1%，隨后體重便逐漸上升直至完全恢復（圖1B及表1）。此外，部分小鼠感染后第3天開始出現(xiàn)豎毛現(xiàn)象，第4天時所有小鼠均出現(xiàn)并持續(xù)至感染后第14天（圖2及表1）。

出現(xiàn)該臨床表現(xiàn)的動物數(shù)量占總觀察數(shù)量的比例。

2. 小鼠模型感染后病毒在組織中復制情況

接種106 TCID50病毒的小鼠在感染后1，2，3，5，7天各安樂解剖6只，來分析病毒的組織分布。從感染后第1天至第7天，小鼠的支氣管肺泡灌洗液（BALF）及肺組織均可檢測到排毒，其中BALF排毒的峰值出現(xiàn)在感染后第1天（103.75 TCID50/ml），而肺組織的排毒峰值出現(xiàn)在感染后第2天（105.69 TCID50/g）（圖3及表2）。除呼吸道外，病毒還可從小鼠的腦、肝、脾、腎、和小腸中檢出（表2）。

病毒檢測陽性的動物數(shù)量占總解剖動物數(shù)量的比例。

3.小鼠模型感染后組織病理損傷

免疫組織化學（IHC）檢測發(fā)現(xiàn)病毒抗原主要分布于肺支氣管上皮細胞、腦脈絡叢、小腸絨毛柱形細胞、以及腎小管內(nèi)（圖4 (i-iv)）。H-E染色結(jié)果證實從感染后第1天起，肺組織即呈現(xiàn)出典型的流感病毒感染的病理表現(xiàn)，包括炎性充血和滲出性病理改變等等。感染后3-7天，肺組織病變面積進一步擴大，并發(fā)展為重度間質(zhì)性肺炎（圖4 (v-viii)）。

4. 小鼠模型感染后血清特異性抗體產(chǎn)生情況

感染后第14天，對存活小鼠的眼眶靜脈叢血清進行血凝抑制實驗（HI），測定對H7N9病毒的特異性抗體效價，結(jié)果證實所有小鼠均出現(xiàn)抗血清轉(zhuǎn)陽，對H7N9病毒的HI效價達80-160。

5. 小鼠模型感染后血常規(guī)檢測結(jié)果

臨床研究證實，患者感染H7N9病毒后，會出現(xiàn)顯著的白血球減少癥。在小鼠模型中，我們同樣觀察到這一現(xiàn)象。與小鼠感染前相比，接種H7N9病毒后第2-7天，小鼠的白細胞總數(shù)出現(xiàn)了顯著下降（P<0.05）。感染后第2天，還可見顯著降低的淋巴細胞和顯著升高的中性粒細胞（P<0.05）（表3）。

白細胞總數(shù)，表示為每微升外周血中103 白細胞數(shù)量。

小鼠由于繁殖周期短、遺傳背景均一、個體差異小等優(yōu)點，被廣泛用作流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機制方面的研究。小鼠多表達禽源流感病毒α2,3SA受體，人源流感病毒α2,6SA受體較少，曾局限的認為小鼠較適合用于α2,3SA受體結(jié)合的流感病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復制能力。

制作流感病毒感染動物模型多應用SPF級雌性BALB/c小鼠，4-6周齡。

病毒株為A/Anhui/1/2013 (H7N9)，BALB/c小鼠經(jīng)過輕度麻醉后滴鼻感染病毒。小鼠感染后觀察14天，監(jiān)測存活率及體重變化率。感染后分時間段安樂小鼠，每個時間點收集相同數(shù)量小鼠肺、脾、腦、心等組織，進行病毒滴度測定和組織病理學檢查。

2013 年3月31日，依據(jù)《國際衛(wèi)生條例（2005）》，中國政府報告上海和安徽發(fā)現(xiàn)3例人感染新型甲型H7N9禽流感病毒（以下簡稱H7N9）病例。在隨后的幾個月內(nèi)，以華東地區(qū)為代表的我國多個省市陸續(xù)確診并報道多例H7N9禽流感病毒感染人造成重癥肺炎甚至死亡的病例，這是世界首次發(fā)現(xiàn)的新型重配H7N9禽流感病毒所致的人感染疫情，引起了廣泛關注。

H7N9禽流感病毒是由H7 的HA 基因，N9 的NA 基因以及H9N2 病毒的6 個內(nèi)部基因片段重配而成的新型病毒。對目前已公布了全基因組的若干H7N9禽流感患者分離株的序列分析結(jié)果顯示，該病毒具有與之前其他亞型甲型流感病毒類似的遺傳特征，包括對禽類低致病性，感染哺乳動物的能力增強，對金剛烷胺類抗病毒藥物耐藥，以及對神經(jīng)氨酸酶抑制劑（如奧司他韋和扎那米韋）敏感。

人感染H7N9禽流感病毒后，臨床表現(xiàn)包括發(fā)熱、咳嗽、呼吸困難、乏力、肌肉酸痛、咯血及胃腸道癥狀，初始癥狀并不包括鼻塞和流涕。97%的患者出現(xiàn)肺炎，超過70%的患者發(fā)生急性呼吸窘迫綜合癥（ARDS），部分患者繼而進展為頑固性低氧血癥和多器官功能衰竭并導致最終死亡。少數(shù)病例為輕癥，均為兒童，常常僅有發(fā)熱表現(xiàn)。實驗室檢測結(jié)果顯示，患者外周血白細胞正?；驕p少，淋巴細胞減少，血小板缺乏，以及肝酶輕度升高。約60%的病例具有各種并發(fā)癥，如冠心病、糖尿病、高血壓和慢性阻塞性肺病。病例以老年人（平均年齡62歲）和男性（69%）居多。

研究顯示，活禽市場是人感染H7N9 禽流感病毒的可能來源。活禽暴露是人感染的關鍵風險因素，導致患者感染的主要暴露方式為直接接觸染毒的活禽、被其排泄物污染的環(huán)境或物品。然而，目前從不同患者體內(nèi)分離到的病毒株基因組序列存在一定的差異，其進化源頭似乎并不相同，因此目前報道的這些病例極有可能是一些獨立的感染事件。流行病學調(diào)查也為這一論點提供了部分佐證。目前已確診的人感染病例多為散發(fā)，彼此間沒有明顯的流行病學關聯(lián)。盡管如此，目前仍有三起疑似家庭聚集案例的報道。

基因進化分析顯示，H7N9 禽流感病毒是一種新型重配病毒。雖然各基因片段分別與近期東亞地區(qū)流行的禽流感病毒同源性較高，但這種基因組成之前從未在禽、人或其他動物中發(fā)現(xiàn)過。其HA 基因可能源于我國長三角地區(qū)鴨群中的H7 亞型禽流感病毒，NA基因的來源目前尚無定論，早期研究認為其源于歐亞遷徙的候鳥，最新研究則指出它與2010-2011年間途徑香港境內(nèi)的候鳥分離到的H11N9和H2N9病毒高度同源。盡管如此，目前無異議的一致的結(jié)論是，野鳥在H7N9 禽流感病毒傳播中可能扮演重要角色，鴨群則在將H7N9相關病毒從野鳥傳至家禽的過程中，起到至關重要的中間宿主作用。