該模型通過長(zhǎng)期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時(shí)，檢測(cè)其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對(duì)濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級(jí)；菌落數(shù)：≤3個(gè)/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動(dòng)物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時(shí)間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過初、中、三級(jí)過濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號(hào)碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng)，以便及時(shí)檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動(dòng)門真空滅菌器消毒。

（10）動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長(zhǎng)、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，配有底盤和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間，同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí)，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測(cè)一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

1、肝臟大體形態(tài)變化

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周,取肝臟組織。

圖1 肝臟大體形態(tài)變化

肉眼可見HFD小鼠模型肝臟呈黃色，輕度腫大。

2、肝臟脂肪水平指標(biāo)檢測(cè)：

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周,取肝臟組織，行Western Blot檢測(cè)脂肪肝相關(guān)指標(biāo)。

圖2 脂肪肝相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)

3、肝臟脂滴染色

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周,取肝臟組織，10%福爾馬林溶液固定，行油紅O染色。

圖3 肝臟組織切片油紅O染色

4、血清脂滴水平檢測(cè)

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周,取血清，檢測(cè)血清中脂滴表達(dá)水平。

圖4 血清脂滴表達(dá)情況

1.C57BL/6J 小鼠

品系來源 ：1921年 C.C.Little用 Lathrop小鼠作近親培育時(shí)，用No7雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。在C57中將毛色呈黑色的進(jìn)行固定，培育成C57BL。1937年Ltle將維持的C57BL第六組亞系定名為C57BL6，將第十組亞系定名為C57BL10，繼而分別維持至今。1947年從 Little引入到美國(guó) Jackson Lab，形成C57BL/6J:1951年從 Jackson Lab將第32代引入到NH，形成c57BL6N亞系；1974年 Charles River從NH引入并于1975年進(jìn)行了剖腹產(chǎn)。六十年代從 Jackson Lab引入到日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中央研究所,1986年自日本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中央研究所引入到中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。2001年中國(guó)北京維通利華從美國(guó) Charles River引入第59代核心群。

2.高脂飲食對(duì)照小鼠：C57BL/6J小鼠，名稱：C57BL/6J小鼠，同類系（Consomic Rat）。

3.誘導(dǎo)方法：C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周，每周監(jiān)測(cè)小鼠體重、飲食及飲水，并分別在第6周和12周檢測(cè)糖耐量和胰島素耐量判斷模型進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，禁食8小時(shí)，取血液測(cè)量血生化等指標(biāo)，取肝臟進(jìn)行稱重，病理及相關(guān)蛋白分析。

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）分原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類，前者與胰島素抵抗和遺傳易感性有關(guān)，而后者則由某些特殊原因所致。營(yíng)養(yǎng)過剩所致體重增長(zhǎng)過快和體重過重，肥胖、糖尿病、高脂血癥等代謝綜合征相關(guān)脂肪肝，以及隱源性脂肪肝均屬于原發(fā)性非酒精性脂肪性肝病范疇；而營(yíng)養(yǎng)不良、全胃腸外營(yíng)養(yǎng)、減肥手術(shù)后體重急劇下降、藥物/環(huán)境和工業(yè)毒物中毒等所致脂肪肝則屬于繼發(fā)性非酒精性脂肪性肝病范疇。

高脂肪飲食誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型是目前應(yīng)用于抗肝臟脂肪變性和脂肪肝病藥物評(píng)估的主要研究模型。非酒精性脂肪肝是無過量飲酒史、肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積以致肝細(xì)胞脂肪變性為主要特征的臨床病理綜合癥。20%碳水化合物、20%蛋白質(zhì)和60%脂肪的高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)小鼠12周，小鼠吃進(jìn)的食物所含的熱量過多，超過機(jī)體的需要，多余的熱量就會(huì)以脂肪的形式貯存起來，導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)堆積增加，肝細(xì)胞損傷加重。